轉(zhuǎn)染是分子生物學(xué)中最常用的技術(shù)之一，也適用于基因治療的研究。基因治療中蛋白質(zhì)最大的功能和挑戰(zhàn)之一是為基因產(chǎn)物提供可靠的單特異性檢測試劑，尤其是抗體。因此，基于目標靶蛋白的表達以及核酸質(zhì)粒的攝取，優(yōu)化轉(zhuǎn)染效率尤為重要。過去，瞬時轉(zhuǎn)染系統(tǒng)大多用于生產(chǎn)天然復(fù)合蛋白，這得益于高效轉(zhuǎn)染方案和懸浮細胞系在高水平生長的可用性密度。對于瞬時表達 ，主要應(yīng)用HEK-293和CHO-K1細胞系，這兩種細胞系均可適應(yīng)懸浮培養(yǎng) ，并且可獲得亞克隆 。

相對于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，瞬時轉(zhuǎn)染具有一個很大的優(yōu)勢：速度。在穩(wěn)定轉(zhuǎn)染需要數(shù)周或數(shù)月的情況下，瞬時轉(zhuǎn)染在數(shù)天內(nèi)完成，從而快速、可靠地獲得少量蛋白質(zhì)來用于實驗。

我們發(fā)現(xiàn)了一種簡單，快速和穩(wěn)健的流式電轉(zhuǎn)儀瞬轉(zhuǎn)法，可用作優(yōu)化轉(zhuǎn)染效率的工具，實現(xiàn)瞬時表達的最佳途徑，耗時短、成本低、效率高，在蛋白藥物候選基因的構(gòu)建和篩選及抗體蛋白的小批量生產(chǎn)中具有很大的優(yōu)勢。這種流式電極技術(shù)在較低的電壓下即能產(chǎn)生足夠強度的均勻電場，可實現(xiàn)90%以上的轉(zhuǎn)染效率和細胞存活率，而且合理的設(shè)備及耗材成本也具有顯著的優(yōu)勢。

X-Porator F1 瞬轉(zhuǎn)體系介紹

流式電轉(zhuǎn)儀 X-Porator F1，在使用 CHO-S、293F 等細胞系反復(fù)實驗驗證后，形成了一套基于 ExpiCHO-S細胞的高表達電轉(zhuǎn)體系，為用戶提供了一套穩(wěn)定、高效的整體方案（包含國產(chǎn)培養(yǎng)體系）。目前，X-Porator F1瞬轉(zhuǎn)體系實現(xiàn)了克級蛋白表達量，將多家客戶瞬轉(zhuǎn)表達量較化轉(zhuǎn)提高了數(shù)倍至數(shù)十倍。

1、工作流程

▲X-Porator F1專用耗材安裝圖

?  將前一步細胞離心的離心管作為上樣容器，加入質(zhì)粒和電轉(zhuǎn)緩沖液；
?  將離心管與 F1 一次性耗材對接，并將全封閉耗材裝配到 F1 設(shè)備上；
?  通過蠕動泵驅(qū)動細胞懸液，細胞經(jīng)過電極芯片，在流動狀態(tài)下完成電轉(zhuǎn)染并被后端離心管收集；
?  取出細胞液直接稀釋培養(yǎng)。

2、產(chǎn)品特點

▲X-Porator F1設(shè)備和專用耗材包

?  單次可電轉(zhuǎn) 1L 培養(yǎng)量的細胞；
?  高達 90%以上轉(zhuǎn)染效率和細胞存活率；
?  較化轉(zhuǎn)蛋白表達時間更短；
?  符合 GMP 標準的耗材；
?  X-Porator F1 設(shè)備參數(shù)可調(diào)整；
?  X-Porator F1 電轉(zhuǎn)適用于細胞原廠培養(yǎng)基的方案，也有國產(chǎn)培養(yǎng)基的替代方案；
? 與其它類似電轉(zhuǎn)染設(shè)備比較，X-Porator F1 瞬轉(zhuǎn)體系具有顯著的成本優(yōu)勢。

結(jié)果節(jié)選

▲實測結(jié)果數(shù)據(jù)節(jié)選